产品详情

2× Super SYBR Green qPCR Mix

货号：HR100

产品概述 Product Description

本产品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行qPCR的专用预混试剂。产品是一种2× 浓度的试剂，含有进行Real Time PCR反应所需的适宜浓度的SYBR Green I。产品采用了经过基因工程技术改造的化学修饰型Hot Start DNA 聚合酶，使之具有很强的扩增能力；同时采用了特别优化过的最佳缓冲液组分，可以有效抑制非特异扩增、显著提高扩增效率，特别适用于进行高灵敏度的qPCR反应。进行实验时，PCR反应液的配制十分简单方便，只需加入模板、引物，最后再加水至指定体积混匀即可。使用本产品进行qPCR反应，可以在宽广的定量区域内得到良好的扩增曲线，对靶基因表达进行准确的定量检测，重复性好，可信度高。

产品组分 Price & Component

*¹：包含热启动DNA聚合酶、buffer、dNTPs、Mg²⁺、SYBR Green I

储存条件 Storage Conditions

本产品应-20°C避光保存，使用过程中请尽量避免反复冻融。如每次使用量较少，推荐分装成小份使用。

适用机型 Instrument Compatibility

本产品适用于不需要使用ROX Reference Dye的qPCR仪器，具体型号如下表所示：

如果所用的qPCR仪器需要添加ROX Reference Dye，则请根据仪器型号选用货号为HR101（ROX1预混型）或HR102（ROX2预混型）的试剂。

关于qPCR引物的设计 Primer Design

进行 Real Time PCR 反应时，设计反应性能良好的 PCR 引物非常重要。根据以下原则，可以设计PCR 扩增效率高，反应特异性强的良好引物。

1）PCR扩增产物长度：80 ~ 150 bp较为合适（可以延长至300 bp）；

2）引物的最适长度为17 ~ 25 bp；

3）引物的GC含量为40% ~ 60%，最好为45% ~ 55%；

4）上游引物和下游引物的Tm值不能相差太大；

5）引物A、T、C、G整体分布尽量均匀，不要有部分的GC富集或者 AT富集，尤其是在3’端；避开T/C或A/G的连续结构；

6）引物3’端碱基最好为G或者C，尽量避免3’末端碱基为T；

7）避开引物内部或者两条引物之间有3个碱基以上的互补序列。两条引物间的3’末端避开有2个碱基以上的互补序列；

8）使用Blast 检索确认引物的特异性。

关于qPCR反应是否良好的判断 Result Evaluation

1）如果扩增曲线呈典型的S型曲线，初始阶段、指数扩增阶段及平台期均完整可见，熔解曲线单峰，内参Ct值在合理范围内（通常可在13 ~ 22之间，典型的内参Ct值在15 ~ 20之间），则可认为该反应正常；

2）如果同一个模板和引物的重复孔数据Ct值相差0.5以内；

同时满足以上两个条件的可以认为数据可用。