产品详情
2× Super SYBR Green qPCR Mix (with ROX1)
货号：HR101
产品概述 Product Description
本产品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行qPCR的专用预混试剂。产品是一种2× 浓度的预混试剂，含有进行Real Time PCR反应所需的适宜浓度的SYBR Green I和高浓度的ROX Reference Dye 1；产品采用了经过基因工程技术改造的化学修饰型Hot Start DNA 聚合酶使之具有很强的扩增能力；同时采用特别了优化过的最佳缓冲液组分，可以有效抑制非特异扩增、显著提高扩增效率，特别适用于进行高灵敏度的qPCR反应。进行实验时，PCR反应液的配制十分简单方便，只需加入模板和引物，再加水至指定体积混匀即可。使用本产品进行qPCR反应，可以在宽广的定量区域内得到良好的扩增曲线，对靶基因表达进行准确的定量检测，重复性好，可信度高。
产品组分 Price & Component
价格 | 150 | 1000 | 4600 | 9000 |
组分 | HR101-T (20 μl体系/100次) | HR101-S (20 μl体系/500次) | HR101 (20 μl体系/2500次) | HR101-L (20 μl体系/5000次) |
2× Super SYBR Green qPCR Mix (with ROX1)*1 | 1 ml（1 ml × 1管） | 5 ml（1 ml × 5管） | 25 ml（1 ml × 25管） | 50 ml（HR101 × 2） |
*1:包含热启动DNA聚合酶、buffer、dNTPs、Mg2+、SYBR Green I、ROX1
储存条件 Storage Conditions
本产品应-20°C避光保存，使用过程中请尽量避免反复冻融。如每次使用量较少，推荐分装成小份使用。
适用机型 Instrument Compatibility
本产品中包含用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差的高浓度ROX Reference Dye 1，适用于以下荧光定量PCR仪：
StepOne™, StepOne Plus™; ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast; |
Roche LightCyclerTM 480; Cepheid SmartCycler®; Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™; Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Illumina Eco qPCR; Qiagen/Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000; Thermo Scientific PikoReal Cycler. |
关于qPCR引物的设计 Primer Design
进行 Real Time PCR 反应时，设计反应性能良好的 PCR 引物非常重要。根据以下原则，可以设计PCR 扩增效率高，反应特异性强的良好引物。
1）PCR扩增产物长度：80 ~ 150 bp较为合适（可以延长至300 bp）；
2）引物的最适长度为17 ~ 25 bp；
3）引物的GC含量为40% ~ 60%，最好为45% ~ 55%；
4）上游引物和下游引物的Tm值不能相差太大；
5）引物A、T、C、G整体分布尽量均匀，不要有部分的GC rich或者 AT rich，尤其是在3’端；避开T/C或A/G的连续结构；
6）引物3’端碱基最好为G或者C，尽量避免3’末端碱基为T；
7）避开引物内部或者两条引物之间有3个碱基以上的互补序列。两条引物间的3’末端避开有2个碱基以上的互补序列；
8）使用Blast 检索确认引物的特异性。
关于qPCR反应是否良好的判断 Result Evaluation
1）如果扩增曲线呈典型的S型曲线，初始阶段、指数扩增阶段及平台期均完整可见，熔解曲线单峰，内参Ct值在合理范围内（通常可在13 ~ 22之间，典型的内参Ct值在15 ~ 20之间），则可认为该反应正常；
2）如果同一个模板和引物的重复孔数据Ct值相差0.5以内；
同时满足以上两个条件的可以认为数据可用。
