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产品选择指南

绝对定量与相对定量的区别简介


1. 绝对定量:是对未知样品的绝对量(拷贝数)进行测定的方法;通常应用于病毒、细菌、衣原体、支原体的定量检测及转基因食品的检测。

绝对定量标准曲线的制作方法:扩增目的基因片段或全长(比real time PCR的基因片段要大),构建入质粒载体,扩增抽提鉴定,测定浓度,根据公式换算成copy/μlcopy/μg,然后制作标准曲线,如从100copy/μl的浓度开始,以10倍的梯度做一系列的点,以各浓度以及对应的Ct值制作标曲,计算曲线的R2,以达到0.999以上为佳。取一定量的样品模板(对照组和实验组)进行real time PCR,根据得到的Ct值,计算目的基因的浓度。

2. 相对定量:是分别测定目的基因和参比基因的量,再求出对于参比基因的目的基因的相对量,最后再进行样品间相对量的比较。主要用于检测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的mRNA表达差异;验证基因芯片、siRNA干扰的实验结果。

因为考察目的是扩增效果,不是考察里面的核酸的量有多少,所以相对定量不需要预先知道样本内的核酸含量。